Monkeypox Virus Real Time PCR கிட்
தயாரிப்பு விவரங்கள்
பயன்படுத்தும் நோக்கம்
நிகழ்நேர பிசிஆர் அமைப்புகளைப் பயன்படுத்தி மனித சீரம் அல்லது லெசியன் எக்ஸுடேட் மாதிரிகளில் குரங்கு பாக்ஸ் வைரஸைக் கண்டறிய இது பயன்படுத்தப்படுகிறது.
சோதனைக் கோட்பாடு
இந்த தயாரிப்பு ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு அடிப்படையிலான Taqman® நிகழ்நேர PCR மதிப்பீட்டு அமைப்பு.Monkeypox வைரஸின் F3L மரபணுவைக் கண்டறிவதற்காக குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகள் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன.மனிதப் பாதுகாக்கப்பட்ட மரபணுவை இலக்காகக் கொண்ட உள் கட்டுப்பாடு, தவறான எதிர்மறையான முடிவுகளைத் தவிர்க்க மாதிரி சேகரிப்பு, மாதிரி கையாளுதல் மற்றும் நிகழ்நேர PCR செயல்முறையை கண்காணிக்கிறது.கிட் ஒரு முழுமையான பிரிமிக்ஸ் லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட அமைப்பாகும், இதில் குரங்கு பாக்ஸ் வைரஸைக் கண்டறிவதற்குத் தேவையான பொருட்கள் உள்ளன: நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்க என்சைம், யுடிஜி என்சைம், ரியாக்ஷன் பஃபர், குறிப்பிட்ட ப்ரைமர் மற்றும் ஆய்வு.
முக்கிய உள்ளடக்கங்கள்
வழங்கப்பட்ட கூறுகள் அட்டவணையில் பட்டியலிடப்பட்டுள்ளன.
| கூறுகள் | தொகுப்பு | மூலப்பொருள் |
| குரங்கு பாக்ஸ் வைரஸ்லியோபிலிஸ்டு பிரீமிக்ஸ் | 8 துண்டு PCR குழாய்கள்× 6 பைகள் | ப்ரைமர்கள், ஆய்வுகள், dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA பாலிமரேஸ், UDG என்சைம் |
| MPV நேர்மறை கட்டுப்பாடு | 400 μL×1 குழாய் | இலக்கு மரபணுவைக் கொண்ட டிஎன்ஏ வரிசைகள் |
| MPV எதிர்மறை கட்டுப்பாடு | 400 μL×1 குழாய் | மனித மரபணுப் பகுதியைக் கொண்ட டிஎன்ஏ வரிசைகள் |
| கரைக்கும் தீர்வு | 1 மில்லி × 1 குழாய் | நிலைப்படுத்தி |
| இணக்கச் சான்றிதழ் | 1 துண்டு | / |
செயல்பாட்டு ஓட்டம்
1. மாதிரிதொகுப்பு:மலட்டு குழாய்களுக்கு ஏற்ப மாதிரி சேகரிக்கப்பட வேண்டும்
நிலையான தொழில்நுட்ப விவரக்குறிப்புகளுடன்.
2. ரீஜென்ட் தயாரிப்பு (உருவாக்க தயாரிப்பு பகுதி)
கிட்டின் கூறுகளை வெளியே எடுத்து, காத்திருப்பு பயன்பாட்டிற்காக அறை வெப்பநிலையில் சமப்படுத்தவும்.
3. மாதிரி செயலாக்கம் (மாதிரி செயலாக்க பகுதி)
3.1 நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல்
வைரஸ் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் கருவிகளின் தொடர்புடைய தேவைகள் மற்றும் நடைமுறைகளுக்கு ஏற்ப, 200μL திரவ மாதிரிகள், நேர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுப்பதற்கான எதிர்மறை கட்டுப்பாடு ஆகியவற்றை எடுக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
3.2 லியோஃபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூள் கரைத்தல் மற்றும் டெம்ப்ளேட் சேர்த்தல்
மாதிரிகளின் எண்ணிக்கைக்கு ஏற்ப Monkeypox Virus Lyophilized premix ஐ தயார் செய்யவும்.ஒரு மாதிரிக்கு Lyophilized premix powder கொண்ட ஒரு PCR குழாய் தேவை.எதிர்மறை கட்டுப்பாடு மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாடு இரண்டு மாதிரிகளாக கருதப்பட வேண்டும்.
(1) Lyophilized premix கொண்ட ஒவ்வொரு PCR குழாயிலும் 15μL கரைக்கும் கரைசலைச் சேர்க்கவும், பின்னர் ஒவ்வொரு PCR குழாயிலும் முறையே 5μL பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மாதிரிகள்/ எதிர்மறை கட்டுப்பாடு/நேர்மறைக் கட்டுப்பாட்டைச் சேர்க்கவும்.
(2) PCR குழாய்களை இறுக்கமாக மூடி, lyophilized தூள் முழுவதுமாக கரைந்து கலக்கும் வரை PCR குழாய்களை கையால் அசைத்து, உடனடி குறைந்த வேக மையவிலக்கு மூலம் PCR குழாய்களின் அடிப்பகுதிக்கு திரவத்தை சேகரிக்கவும்.
(3) கண்டறிவதற்கு பொதுவான நிகழ்நேர PCR கருவியைப் பயன்படுத்தினால், பின்னர் நேரடியாக PCR குழாய்களை பெருக்கப் பகுதிக்கு மாற்றவும்;கண்டறிதலுக்கு BTK-8 ஐப் பயன்படுத்தினால், பின்வரும் செயல்பாடுகளைச் செய்ய வேண்டும்: பிசிஆர் குழாயிலிருந்து 10 μL திரவத்தை BTK-8 இன் எதிர்வினை சிப் கிணறுக்கு மாற்றவும்.ஒரு PCR குழாய் சிப்பில் உள்ள ஒரு கிணற்றுடன் ஒத்துள்ளது.குழாய் பதிக்கும் போது, குழாய் 90 டிகிரி செங்குத்தாக இருப்பதை உறுதி செய்யவும்.ஏரோசல் தடுப்பு குழாய் முனைகள் மிதமான விசையுடன் கிணற்றின் மையத்தில் வைக்கப்பட வேண்டும் மற்றும் குழாய் முதல் கியரை அடையும் போது (குமிழிகளைத் தவிர்க்க) தள்ளுவதை நிறுத்த வேண்டும்.கிணறுகள் நிரம்பிய பிறகு, அனைத்து கிணறுகளையும் மறைப்பதற்கு ஒரு எதிர்வினை சிப் சவ்வு எடுக்கவும், பின்னர் சிப் பெருக்க கண்டறிதல் பகுதிக்கு மாற்றப்படும்.
4. PCR பெருக்கம் (கண்டறிதல் பகுதி)
4.1 பிசிஆர் குழாய்கள்/எதிர்வினை சிப்பை வினைத் தொட்டியில் வைத்து, ஒவ்வொரு வினையின் பெயர்களையும் அதற்குரிய வரிசையில் அமைக்கவும்.
4.2 கண்டறிதல் ஃப்ளோரசன்ஸின் அமைப்புகள்: (1) Monkeypox வைரஸ் (FAM);(2) உள் கட்டுப்பாடு (CY5).
4.3 பின்வரும் சைக்கிள் ஓட்டுதல் நெறிமுறையை இயக்கவும்
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio இன் நெறிமுறை:
| படிகள் | வெப்ப நிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் | |
| 1 | முன் குறைதல் | 95℃ | 2 நிமிடங்கள் | 1 |
| 2 | டினாடரேஷன் | 95℃ | 10 வி | 45 |
| அனீலிங், நீட்டிப்பு, ஃப்ளோரசன்ஸ் கையகப்படுத்தல் | 60℃ | 30 வி | ||
BTK-8 நெறிமுறை:
| படிகள் | வெப்ப நிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் | |
| 1 | முன் குறைதல் | 95℃ | 2 நிமிடங்கள் | 1 |
| 2 | டினாடரேஷன் | 95℃ | 5 வி | 45 |
| அனீலிங், நீட்டிப்பு, ஃப்ளோரசன்ஸ் கையகப்படுத்தல் | 60℃ | 14 வி | ||
5. முடிவுகள் பகுப்பாய்வு (தயவுசெய்து கருவி பயனர் கையேட்டைப் பார்க்கவும்)
எதிர்வினைக்குப் பிறகு, முடிவுகள் தானாகவே சேமிக்கப்படும்.பகுப்பாய்வு செய்ய "பகுப்பாய்வு" என்பதைக் கிளிக் செய்யவும், மேலும் கருவியானது ஒவ்வொரு மாதிரியின் Ct மதிப்புகளையும் முடிவு நெடுவரிசையில் தானாகவே விளக்குகிறது.எதிர்மறை மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாட்டு முடிவுகள் பின்வரும் "6. தரக் கட்டுப்பாடு"க்கு இணங்க வேண்டும்.
6. தர கட்டுப்பாடு
6.1 எதிர்மறை கட்டுப்பாடு: FAM சேனலில் Ct அல்லது Ct>40 இல்லை, சாதாரண பெருக்க வளைவுடன் CY5 சேனலில் Ct≤40.
6.2 நேர்மறை கட்டுப்பாடு: சாதாரண பெருக்க வளைவு கொண்ட FAM சேனலில் Ct≤35, சாதாரண பெருக்க வளைவுடன் CY5 சேனலில் Ct≤40.
6.3 மேலே உள்ள அனைத்து நிபந்தனைகளும் பூர்த்தி செய்யப்பட்டால் முடிவு செல்லுபடியாகும்.இல்லையெனில், முடிவு தவறானது.
முடிவு விளக்கம்
பின்வரும் முடிவுகள் சாத்தியமாகும்:
| FAM சேனலின் Ct மதிப்பு | CY5 சேனலின் Ct மதிப்பு | விளக்கம் | |
| 1# | Ct அல்லது Ct>40 இல்லை | ≤40 | குரங்கு பாக்ஸ் வைரஸ் எதிர்மறை |
| 2# | ≤40 | ஏதேனும் முடிவுகள் | குரங்கு பாக்ஸ் வைரஸ் நேர்மறை |
| 3# | 40-45 | ≤40 | மீண்டும் சோதனை;இன்னும் 40~45 ஆக இருந்தால், 1# எனப் புகாரளிக்கவும் |
| 4# | Ct அல்லது Ct>40 இல்லை | Ct அல்லது Ct>40 இல்லை | செல்லாதது |
குறிப்பு: தவறான முடிவு ஏற்பட்டால், மாதிரி சேகரிக்கப்பட்டு மீண்டும் சோதிக்கப்பட வேண்டும்.
ஆர்டர் தகவல்
| பொருளின் பெயர் | பூனை.இல்லை | அளவு | மாதிரி | அடுக்கு வாழ்க்கை | டிரான்ஸ்.& ஸ்டோ.வெப்பநிலை |
| Monkeypox Virus Real Time PCR கிட் | B001P-01 | 48 சோதனைகள்/கிட் | சீரம்/ லெஷன் எக்ஸுடேட் | 12 மாதங்கள் | -25～-15℃ |
